熱原檢查
熱原檢查目前各國藥典仍為家兔法。
家兔法:選用家兔作試驗(yàn)動(dòng)物,是因?yàn)榧彝脤?duì)熱原的反應(yīng)和人是相同的。具體試驗(yàn)方法和結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)參看《中國藥典2005版》二部附錄。采用直腸熱電偶代替直腸溫度計(jì),熱電偶在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中固定在直腸內(nèi),其溫度可在儀表中顯示出來。因而免除對(duì)單個(gè)家兔溫度多次測量操作。國內(nèi)四川綿陽醫(yī)用電子儀器廠生產(chǎn)的RY型熱原測試儀基本上符合這種要求,具有分辨率高,讀數(shù)精確的優(yōu)點(diǎn),同時(shí)可測雖16只動(dòng)物,能滿足一般熱原測定需要。
鱟試驗(yàn)法:利用鱟的變形細(xì)胞溶解物與內(nèi)毒素之間的膠凝反應(yīng),試驗(yàn)時(shí)制備或購買鱟熱原試劑,即送變形細(xì)胞溶解物。然后取一定量的熱原試劑,加入一定量的供試品放入潔凈的無熱原試管中,于37℃水溶液中培育60分鐘,觀察結(jié)果。同時(shí)作陰性對(duì)照。判斷如下:如試驗(yàn)品出現(xiàn)凝膠或粘稠度和不透明度增加者為陽性反應(yīng),表明供試品有熱原。若供試品無變化或僅有絮狀物者為陰性,表明供試品無熱原。
有人比較兔試驗(yàn)與鱟試驗(yàn)法的靈敏性,結(jié)果說明鱟試驗(yàn)法能檢出0.0001ug的內(nèi)毒素,而兔試驗(yàn)法只能檢出0.001ug的內(nèi)毒素,故認(rèn)為鱟試驗(yàn)比免試驗(yàn)靈敏十倍。鱟試驗(yàn)特別適用于某些不能用家免進(jìn)行熱原檢測的品種,如放射性藥劑、腫瘤抑制劑等。因?yàn)檫@些制劑具有細(xì)胞毒性具有一定的生物效應(yīng),用家兔檢測是不適宜的。
其對(duì)革蘭氏陰性以外的內(nèi)毒親不夠敏感,不能代替家兔熱原試驗(yàn)法。
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